植物原花青素試劑盒說明書-相關(guān)技術(shù)文章

更新時間：2025-02-17

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植物原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins, OPC）試劑盒說明書

微量法 100T/48S

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一類黃烷醇單體及其聚合體的多酚化合物，廣泛存在于植物的各種器官中，具有ji強的抗氧化性和清除自由基的作用，廣泛的應(yīng)用于醫(yī)藥，食品，化妝品，保健品行業(yè)。

在酸性條件下，植物原花青素 A 環(huán)上的間苯二酚和間苯san酚與香草醛發(fā)生縮合反應(yīng)，產(chǎn)生有色化合物，在 500nm 處有特征吸收峰，測定 500nm 光吸收值可計算原花青素的含量。

試劑二：粉劑 0.1g×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加 10ml 甲醇溶解。測定工作液：臨用前按照用量將試劑一和試劑二按照 1:1 混合。

空白工作液：臨用前按照用量將試劑一和甲醇按照 1:1 混合。

天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水、鹽酸、無水乙醇和甲醇。

稱取約 0.1g 樣本，加入 2ml 提取液，勻漿后，60℃振蕩提取 2h， 10000g，25℃，離心 10min，取上清待測。

1、分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 500nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表

	對照管	測定管
樣本（μl）	40	40
測定工作液（μl）		160
空白工作液（μl）	160
混勻，30℃水浴 30min，于微量石英比色皿/96 孔板中檢測 500nm 處吸光值，ΔA=A 測定-A 對照，每個測定管設(shè)一個對照管。

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0194x+0.0006，R²=0.999

OPC 含量（mg/g 鮮重）= (ΔA-0.0006）÷0.0194×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×10^-³

= 0.515×(ΔA-0.0006）÷W

V 樣總：加入提取液體積，2ml； V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04ml；W：樣品質(zhì)量，g

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0097x+0.0006，R²=0.999

OPC 含量（mg/g 鮮重）= (ΔA-0.0006）÷0.0097×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×10^-³

= 1.03×(ΔA-0.0006）÷W

V 樣總：加入提取液體積，2ml； V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04ml；W：樣品質(zhì)量，g

1、配制好的試劑二應(yīng)盡快使用，4℃保存時間不超過一個月。

2、吸光度變化應(yīng)該控制在 0.01～0.8 之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。

3、*低檢出限為 10μg/g。